巴氏染色液的染色步驟
巴氏染色液的染色步驟：固定的目的細(xì)胞制片的迅速固定是制片過程中關(guān)鍵的一步，否則會(huì)影響細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性。對(duì)于不同的標(biāo)本需要不同的固定方法。最為常用的固定方法是95%酒精作為固定液的濕固定法。酒精作為一種脫水劑能夠防止細(xì)胞內(nèi)的酶捋蛋白質(zhì)分解而自容，并凝固細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、脂肪和糖類等，使其保持與組織生活相仿的成分，從而使細(xì)胞各部分，尤其核染色質(zhì)易于著色。對(duì)于巴氏染色來說，酒精固定最為重要的。如果酒精濃度不足引起的固定不佳，可造成細(xì)胞的人為變化，并可導(dǎo)致假陽性或假陰性的診斷。
1、固定方法濕固定法：作為用95%酒精固定液固定的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本一定使用濕固定法。制片制備完后，趁標(biāo)本新鮮而又濕潤(rùn)時(shí)，立即放入盛有95%酒精的固定缸內(nèi)。制片在固定液內(nèi)至少保持15-30min。固定時(shí)間通常不超過1周。這種制片染色后，顏色鮮艷，結(jié)構(gòu)清晰。如果細(xì)胞制片需要送至另一實(shí)驗(yàn)室或郵寄他處染色時(shí)，可以固定15min后，把制片取出后立即密封的容器中或者使用甘油防止制片干燥。因?yàn)闊o論固定前或固定后的制片，如果發(fā)生干燥后都會(huì)影響染色的效果。
2、固定注意事項(xiàng)固定液的過濾：為了防止細(xì)胞污染，凡是使用過的固定液，必須過濾后才能再使用。使用過長(zhǎng)的固定液，必須用酒精相對(duì)密度計(jì)測(cè)定，酒精濃度低于90%時(shí)應(yīng)該及時(shí)更換新液。濕固定的重要性：標(biāo)本再新鮮時(shí)及時(shí)固定時(shí)保證染色效果的重要因素。如蘇木素對(duì)細(xì)胞核的染色，巴氏染色中胞漿的特殊著色作用，均可因標(biāo)本干燥后固定而大受影響。制片標(biāo)本的郵寄：標(biāo)本再固定15min后取出，立即加甘油數(shù)滴于制片上，裝入密封的小盒中。實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo)本后，先浸入95%酒精中，使甘油溶去，再進(jìn)行染色。
