革蘭氏染色液為什么會有不同的顏色？
假如人們把病菌當做是個雞蛋得話，那麼細胞壁就好像像蛋殼。它包囊在體細胞表層，是里側緊靠細胞質的1個比較堅毅、略具延展性的構造，具備固定不動病菌外觀設計和維護病菌體細胞等幾種作用。
因為病菌體細胞小而全透明，務必對它開展染色劑，使染色劑后的菌體與背景圖產生顯著的偏色，進而在般光學顯微鏡下更清晰地觀查其形狀。1884年名美國大夫C.Gram根據初染、媒染、褪色和復染三步實際操作，將全部病菌區(qū)別為兩類：染色劑反映后呈紫藍色的稱之為革蘭陽型病菌，用G+表達；染色劑反映后呈鮮紅色的稱之為革蘭呈陰性病菌，用G-表達。大部分病毒性革蘭陰性桿菌都歸屬于革蘭陽性菌，而大部分腸胃菌多歸屬于革蘭陰性菌。病菌對革蘭染色的不樣反映，我覺得就是說因為細胞壁的成份和構造不樣而導致的。
不論是革蘭陽性菌還是革蘭陰性菌，細胞壁的關鍵構成是由這種被稱作肽聚糖的化學物質組成。這種化學物質能夠織成1個反射性較強的多孔結構，即宛如建筑鋼筋骨架圖網組成的片層；終再根據這種被稱作磷壁酸的化學物質將多孔結構的片層開展互相門鉸鏈，終產生了條很厚病菌“城門”——細胞壁。雖然體細胞內高血漿滲透壓，體細胞外低滲的氧分子持續(xù)進到體細胞內，但細胞壁可以把體細胞牢牢地地箍住，避免體細胞溶脹裂開。而人們平常根據食鹽水侵泡方式 來清洗新鮮水果，或者在高濃的椰子水中侵泡的食材不容易環(huán)境污染病菌，其基本概念就是說外界導致的高血漿滲透壓自然環(huán)境，導致體細胞內氧分子向外外滲，造成病菌造成質壁瓦解而身亡。
所不樣的是，革蘭陽性菌的細胞壁簡易，厚而高密度，高達20層。肽聚糖占90%，其他的10%為磷壁酸。革蘭陰性菌的細胞壁薄而繁雜，肽聚糖層僅1到2層，稀少而沖擊韌性差，肽聚糖層外也有脂多糖、不飽和脂肪酸和脂蛋白等化學物質構成的外膜，有時候也稱之為表面。
普遍革蘭陽型病菌：有芽胞的鏈球菌，大部分的革蘭陰性桿菌，全部放線菌和細菌；普遍革蘭呈陰性病菌：弧菌，螺旋體和大部分高致病的無芽孢桿菌
革蘭氏染色步驟
1、介紹：
革蘭氏染色法歸屬于復染法，是細菌學中普遍的這種鑒別染色法。沒經染色劑的病菌，因為其與周邊環(huán)境折射率區(qū)別不大，故在光學顯微鏡下不易觀查，染色劑后，病菌與自然環(huán)境產生特的比照，能夠清晰地觀查到病菌的形狀、排序及些特點，用于歸類辨別。
2、試驗流程：
革蘭氏染色法通常包含初染、媒染、褪色、復染等4個流程，具體步驟方式 是：
1）取載玻片用沙布擦水，載玻片的邊用marker字的筆畫1個小圈（用于大概明確菌液體的部位）。涂菌的位置在火苗上烤下下，去除植物油脂。
2）抗酸染色：
液體培養(yǎng)液：右手持菌液試管嬰兒，在酒精噴燈火苗周邊5cm上下開啟管蓋；左手持接種環(huán)在火苗中灼燒殺菌，等水冷卻后從試管嬰兒中沾取菌液個環(huán)節(jié)，在清潔無脂的載玻片上涂直徑2mm上下的聚氨酯涂料，終將接種環(huán)在火苗上灼燒殺菌（通常狀況下應用固態(tài)培養(yǎng)液）。
固態(tài)培養(yǎng)液：先往載玻片上滴幾滴無菌檢測水，再用接種環(huán)取小量菌體，涂在載玻片上，使其薄而勻稱。
3）晾曬：讓抗酸染色在氣體中大自然干躁。
4）固定不動：讓菌膜朝上，根據火苗2-3次固定不動（以不發(fā)燙為宜）。
5）染色劑：滴加1至2滴革蘭結晶紫液（Gram Crystal Violet）遮蓋菌膜，染1min，自來水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
6）媒染：滴加1至2滴革蘭碘液（Gram Iodine）遮蓋菌膜，染1min，自來水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
7）褪色：持續(xù)滴加95%酒精（Gram Decolorizer 革蘭脫色劑）褪色20-30s至排出液無藍紫色，馬上自來水遲緩清洗抗酸染色上的染色液，用吸水紙吸走。
8）復染：滴加1至2滴革蘭蕃紅（Gram Safranin）復染1-2min，手洗，汲取殘余水。到此，革蘭氏染色完畢。
9）觀查：用光學顯微鏡變大陪數(shù)觀查色調。
3、基本原理：
1）根據結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內產生了不溶解水的結晶紫與碘的復合物；
2）革蘭氏陽性菌因為其細胞壁過厚、肽聚糖網層級較多且化學交聯(lián)高密度，故遇酒精或甲苯褪色解決時，因缺水反倒使孔環(huán)變小，加上它沒有類脂，故酒精解決不容易出現(xiàn)間隙，因而可以結晶紫與碘復合物緊緊留到壁內，使其仍呈藍紫色；
簡易了解：革蘭氏陰性菌的細胞壁類脂含水量低，酒精在褪色時反倒使細胞壁脫干進而肽聚層直徑變小，減少了細胞壁的滲透性，進而使病菌保存了初染的色調，紫藍色；
3）革蘭氏陰性菌以其細胞壁薄、外膜層類脂含水量高、肽聚糖層薄且化學交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂主導的外膜快速融解，薄而疏松的肽聚糖網不可以阻攔結晶紫與碘復合物的溶出，因而根據酒精褪色后仍呈沒有顏色，再經沙黃等鮮紅色染劑復染，就使革蘭氏陰性菌呈鮮紅色；
簡易了解：革蘭氏陰性菌的細胞壁類脂含水量高，酒精在褪色時融解了類脂質，提升了細胞壁的滲透性，進而復合物外滲，再復染時再呈鮮紅色；
4、結果：
染色劑的差別關鍵是因為呈陰性與陽型病菌細胞壁的差別所造成的。革蘭氏陽性菌呈紫藍色，革蘭氏陰性菌呈鮮紅色。
5、將會偏差：
在試驗中常常會出現(xiàn)假陽性和假呈陰性的結果，假陽性關鍵是因為褪色不徹底，將會是因為抗酸染色過厚，或是是結晶紫染色劑過多，造成褪色不徹底。假呈陰性將會由于體細胞固定不動過多，導致細胞壁滲透性的更改，而出現(xiàn)假呈陰性結果；另個，細胞培養(yǎng)時間過長，將會早已有部分體細胞產生身亡或是自溶，也造成細胞壁滲透性的更改而出現(xiàn)假呈陰性結果。
