革蘭氏染色液的性能測試注意什么
生物制品,這個域的發展直都是被大眾所關注的,而且,革蘭氏染色法是細菌學中普遍使用的種鑒別染色法,這種染色法是由位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram,1853年-1938年)于1884年所發明,初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關系。染色后細菌與環境形成鮮明對比,能夠清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征,而用以分類鑒定。那么,革蘭氏染色液的性能測試注意什么?
外觀控制:制備好的培養基應有相應的顏色,般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化,會不會蒸發/脫水。
污染控制:從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗),確定無微生物生長方可使用。
性能測試:
1.測試菌株選擇 測試菌株是具有其代表種的穩定特性并能有效證明實驗室特定培養基*性能的套菌株,應來自國際/標準菌種保藏中心ATCC標準菌株,菌株的選擇參考衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。
2.定量測試方法 改良Miles-Misra法 測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋;測試平板和參照平板劃分為4個區域并標記;從*稀釋度開始,分別滴滴稀釋液于試驗平板和對照平板標記好的區域;將稀釋液涂滿整個1/4區域,37°C培養18小時;對易計數的區域計數,按公式計算生長率(生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數)。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.7,該類培養基應易于目標菌生長;選擇性培養基上目標菌的生長率應不低于0.1。
3.半定量測試方法 改進的劃線法接種法 平板分ABCD四區,共劃16條線,平行線大概相隔0.5cm,每條有菌落生長的劃線記作1分,每個僅半的線有菌落生長記作0.5分,沒有菌落生長或生長量少于劃線的半記作0分,分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長,而非目標菌的生長應部分或完全被抑制,目標菌的生長指數G大于6時,培養基可接受 。
4.定性測試方法 平板接種觀察法 用接種環取測試菌培養物,在測試培養基表面劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種后的平板進行培養,目標菌應呈現良好生長,并有典型的菌落外觀、大小和形態,非目標菌應是微弱生長或無生長 。
革蘭氏染色液的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎,事關檢測工作的準確性、可靠性,在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何個環節的質量問題,都將導致檢驗結果科學性、客觀性的偏離。因此,加強培養基的實驗室質量控制,認真地做好培養基的質控工作,不斷完善和提高培養基的質控水平,才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。